產(chǎn)品詳情
簡單介紹：
小鼠胚胎成纖維細胞
詳情介紹：
產(chǎn)品基本信息
| 細胞名稱: | 小鼠胚胎成纖維細胞 |
|---|---|
| 種屬來源: | 小鼠 |
| 組織來源: | 取妊娠13.5d、14.5d的孕鼠昆明小鼠或者C57BL/6小鼠 |
| 疾病特征: | 正常原代細胞 |
| 細胞形態(tài): | 成纖維細胞樣 |
| 生長特性: | 貼壁生長 |
| 培養(yǎng)基: | 小鼠胚胎成纖維細胞培養(yǎng)基 |
| 生長條件: | 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%; 溫度：37 ℃, |
| 傳代方法: | 1：2至1：6，每周2次。 |
| 凍存條件: | 90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲存 |
| 細胞鑒定: | Vimentin與Keratin蛋白免疫熒光染色法 |
| QC檢測: | 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。 |
小鼠胚胎成纖維細胞特點和簡介
胚胎干細胞（Embryonic Stem Cell，ESC）是由囊胚的內(nèi)細胞團（InnerCellMass，ICM）分離培養(yǎng)的具有全能分化特性的細胞，具有長期自我增殖、自我更新和多向分化的潛能，能夠再生出各種功能細胞和組織器官。體外培養(yǎng)ESC的基本原則是在促進ESC增殖的同時，維持其未分化的二倍體狀態(tài)，保持其向三個胚層細胞分化的潛能。ESC體外培養(yǎng)主要采用飼養(yǎng)層培養(yǎng)法，目前使用*普遍的飼養(yǎng)層細胞有小鼠胚胎成纖維細胞（Mouse Embryonic Fibroblast，MEF）及小鼠成纖維細胞無限系（STO）細胞。MEF作為飼養(yǎng)層培養(yǎng)ESC是一種*常用的方法，它能有效地促進ESC的增殖并維持其未分化性和多潛能性，可用于大多數(shù)動物ESC的分離，大多數(shù)實驗室均采用該細胞。
小鼠胚胎成纖維細胞接受后處理
1) 收到細胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
4) 如果細胞密度達80%-90%請及 時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
5) 接到細胞次日，請檢查細胞是 否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。
小鼠胚胎成纖維細胞培養(yǎng)操作
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。**天換液并 檢查細胞密度。2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
小鼠胚胎成纖維細胞培養(yǎng)注意事項
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時和我們聯(lián)系。2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細胞因子 等，確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問 題，責任由客戶自行承擔。
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶 壁脫落，將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均 會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細胞無活 力，請拍下 照片及時和我們聯(lián)系，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。
4. 靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng)，待細 胞匯 合度 80%左右時正常傳代。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件。
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和 Procell 技術(shù) 部 溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián) 系，告知細胞的具體情況，以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7.該細胞僅供科研使用。